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技術(shù)文章
流式細胞儀實驗方法
2013
6-18流式細胞儀實驗方法一、實驗準備1．標本制備：2．zui小化非特異性結(jié)合：二、凋亡1．凋亡的檢測方法：和其它2．PI染色法3．AnnexinV法4．TUNNEL法三、細胞因子1．激活的細胞因子2．CBA四、血小板1．活化2．活化檢測3．網(wǎng)織血小板五、紅細胞1．網(wǎng)織紅細胞2．PNH3．胎兒紅細胞六、腫瘤學1．DNA細胞周期2．蛋白3．多藥耐藥4．微小殘留白血病*部分標本處理一、流式細胞術(shù)常規(guī)檢測時的樣品制備（一）直接免疫熒光標記法取一定量細胞（約1X106細胞／ml），在每一管中...+ -
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流式細胞儀標本的制備
2013
6-18流式細胞儀標本的制備流式細胞儀（FCM）是八十年代集單克隆抗體、熒光化學、激光、計算機等高技術(shù)發(fā)展起來的一種先進儀器，已廣泛應用于免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規(guī)工作。其中檢測人白細胞表面標志可對白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷，對淋巴細胞群和亞群進行分類，還能分離純化某一群或亞群細胞。活細胞免疫熒光技術(shù)是用于FCM檢測的標本準備，染色后也能在熒光顯微鏡下進行觀察，在某些實驗條件下，活細胞免疫熒光染色后的特異性和敏感性要優(yōu)于滴片固定的常規(guī)間接免...+ -
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ELISA原理，以及操作步聚
2013
6-18ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領(lǐng)域。（一）原理ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除...+ -
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標本的收集與保存注意事項
2013
6-18標本的收集與保存臨床檢驗常見的標本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些標本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。一、血液標本有些生理因素，如吸煙、進食、運動、情緒波動、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標本的采集應盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無法避免，應在標本上注明該因素。1．外周血一般選取左手無名指內(nèi)側(cè)采血，該部位應無凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他手指...+ -
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免疫檢測的基礎知識
2013
6-181、免疫檢測的基礎知識ELISA是一種免疫測定。免疫測定（immunoassay，IA）是應用免疫學技術(shù)測定標本的方法。在臨床檢驗中主要通過抗原抗體反應檢測體液中的抗體或抗原性物質(zhì)。1.1抗原抗原是能在機體中引起特異性免疫應答的物質(zhì)?？乖M入機體后，可刺激機體產(chǎn)生抗體和引起細胞免疫。在免疫測定中，抗原是指能與抗體結(jié)合的物質(zhì)。能在機體中引起抗體產(chǎn)生的抗原多為分子量大于5000的蛋白質(zhì)。小分子化合物在與大分子蛋白質(zhì)結(jié)合后能引起機體產(chǎn)生特異性抗體的，稱為半抗原（hapten）。例如...+ -
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Western Blot 原理和操作方法
2013
6-18WesternBlot工作原理蛋白質(zhì)的電泳分離是重要的生物化學分離純化技術(shù)之一,電泳是指帶電粒子在電場作用下,向著與其電荷相反的電極移動的現(xiàn)象.根據(jù)所采用的支持物不同,有瓊脂糖凝膠電泳,淀粉凝膠電泳,聚丙烯酰胺凝膠電泳等.其中,聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）由于無電滲作用,樣品用量少（1-100μg）,分辨率高,可檢出10-9-10-12mol的樣品,凝膠機械強度大,重復性好以及可以通過調(diào)節(jié)單體濃度或單體與交聯(lián)劑的比例而得到孔徑不同的凝膠等優(yōu)點而受到廣泛的應用.SDS-PAG...+ -
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熒光探針Fluo-3/AM和FuraRed測量單細胞中比率鈣
2013
6-18熒光探針Fluo-3/AM和FuraRed測量單細胞中比率鈣中國醫(yī)學物理學雜志1999年第3期第16卷實驗研究作者：馬曉冬朱曉亮趙清張瑾張颯雷國華黃行許鮑永耀單位：馬曉冬趙清張瑾張颯雷國華黃行許鮑永耀（*軍醫(yī)大學中心實驗室）；朱曉亮（南方醫(yī)院皮膚科,廣東廣州510515）關(guān)鍵詞：激光掃描共聚焦顯微鏡；Fluo-3/AM；FuraRed；比率鈣...摘要：應用ACAS570激光掃描共聚焦顯微鏡（laserscanningconfocalmicroscope，LSCM簡稱共焦顯微...+ -
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激光掃描共焦顯微鏡原理及其應,細胞上的定位很漂亮
2013
6-18激光掃描共焦顯微鏡（LSCM）是八十年代問世的一種新型分析儀器，由于其高分辨率，高靈敏度，高放大率等特點，在細胞水平上能作多種功能測量和分析，成為分析細胞學的重要研究工具，激光掃描共焦顯微鏡是在顯微鏡基礎上配置激光光源，掃描裝置，共軛聚焦裝置和檢測系統(tǒng)而形成的新型顯微鏡。它對活細胞分層掃描后得到光學切片，可進行細胞三維重建。測量分析細胞形態(tài)學參數(shù)和熒光強度。利用熒光探針標記LSCM可以對細胞內(nèi)微細結(jié)構(gòu)和離子的動態(tài)變化進行定性、定量、定時和定位分析。LSCM可以進行顯微手術(shù)，細...+ -
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流式細胞儀測定血小板胞漿游離鈣濃度
2013
6-18摘要：目的建立流式細胞儀測定血小板胞漿游離鈣離子濃度\[Ca2+\]i的方法。方法用Fluo3AM作為鈣指示劑，在有或無細胞外鈣\[Ca2+\]o存在的條件下，測定靜息和凝血酶激活狀態(tài)下人血小板胞漿游離鈣離子濃度\[Ca2+\]i的變化。結(jié)果Fluo3AM標記的血小板的平均熒光強度明顯增加。凝血酶使負載Fluo3AM標記的血小板胞漿\[Ca2+\]i明顯增加，且顯示劑量依賴和對\[Ca2+\]o的依賴。結(jié)論凝血酶引起血小板胞漿\[Ca2+\]i增加的來源主要是\[Ca2...+ -
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如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基？
2013
6-18培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊?，MEM做粘附細胞培養(yǎng)"細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)"細胞培養(yǎng)是一個好的開始，各種目的無血清培養(yǎng)AIMV（12005）培養(yǎng)基（SFM）。L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，但是確切的降解率一...+ -
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流式細胞術(shù)檢測時的樣品制備方法
2013
6-18（一）直接免疫熒光標記法取一定量細胞（約1X106細胞／ml），在每一管中分別加入50μl的HAB，并充分混勻，于室溫中靜置1分鐘以上（）,再直接加入連接有熒光素的抗體進行免疫標記反應（如做雙標或多標染色，可把幾種標記有不同熒光素的抗體同時加入），。孵育20-60分鐘后，用PBS（pH7．2—7．4）洗1-2次，加入緩沖液重懸，上機檢測。本方法操作簡便，結(jié)果準確，易于分析，適用于同一細胞群多參數(shù)同時測定。雖然直標抗體試劑成本較高，但減少了間接標記法中較強的非特異熒光的干擾，因...+ -
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影響ELISA試驗效果常見分析,和解決思路
2013
6-18ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。操作步驟可能原因解決辦法選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣；2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是...+
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